1.肾活检病理阅片的基本原则和规范要求:
首先要进行切片组织样本的核对,包括与病理申请单上的患者信息和病理编号进行核对,与肾活检取材时记录的大体样本核对,包括光镜样本、免疫荧光样本和电镜样本的组织大小与块数等,确保患者与观察样本的对应无误。通常需要建一个包含病理申请单上的患者信息、样本来源信息、取材时间及其编号(包括光镜、免疫荧光和电镜的编号)在内的病理标本登记本(或电子表格)。每种病理检查阅片前,需要核对上述信息。
光镜组织病理学观察能够反映肾脏整体病理改变的特点,包括肾小球、肾小管、肾间质以及肾血管等各个部位的组织结构改变、外来的免疫沉积物及其分布范围和严重程度,是反映肾脏病理改变的基石。从低倍整体观察,到高倍具体病变的辨别,并在不同染色切片进行分析比对。首先对活检组织的取材状况及突出病变进行整体评估,包括活检组织块的大小和数目、皮质和髓质的比例,硬化的肾小球及可观察肾小球的数目、肾小球的体积及血液灌注状态等。肾小球病变的观察包括系膜病变(系膜细胞增生、系膜基质增多、系膜区增宽、系膜结节状硬化、分叶状改变、系膜溶解及系膜沉积物等)、毛细血管腔内病变(毛细血管腔内细胞增多、中性粒细胞浸润、血栓、白金耳结构、透明血栓、脂蛋白栓塞等)、肾小球毛细血管壁病变(肾小球毛细血管壁皱缩、血栓性微血管病样病变、基底膜增厚、钉突样或链环样改变、双轨征及睫毛状或毛刺样改变)、肾小球毛细血管袢病变(纤维素样坏死、节段性硬化、球囊粘连等)、毛细血管外病变即新月体形成(细胞性、细胞纤维性及纤维性新月体)和鲍曼囊壁病变(球囊滴状变性、囊壁增厚、囊壁断裂、囊周纤维化等)。
肾小管间质病变的观察,包括急性病变和慢性病变的观察。急性肾小管损伤观察肾小管上皮细胞坏死、空泡变性、蛋白质吸收滴、刷状缘脱落、崩解及再生、裸基底膜等;急性间质性肾炎观察肾间质水肿及炎症病变的面积、部位(在皮质、髓质的分布)以及浸润的细胞成分(淋巴、单核巨噬细胞,嗜酸性或中性粒细胞、浆细胞等)等;对肾小管腔内管型(红细胞管型、白细胞管型、Tamm-Horsfall蛋白管型、骨髓瘤管型)、肾小管间质内结晶(尿酸盐、草酸盐、磷酸盐等)及肉芽肿结构等逐一观察。移植肾标本还需要对肾间质炎症、肾间质出血、肾小管炎、管周毛细血管炎以及肾小管上皮内病毒包涵体等观察及半定量评估。肾间质纤维化伴肾小管萎缩(IFTA)病变,应根据其占肾皮质面积的比例,分为轻度(≤25%)、中度(26%~50%)及重度(>50%)进行描述。
肾血管病变的观察,常见病变包括细小动脉的玻璃样变性和小叶间动脉内膜增厚及管腔狭窄,其他血管病变包括血管壁纤维素样坏死、血管炎、动脉内膜炎以及血栓性微血管病(包括小动脉内膜黏液样水肿、洋葱皮样增生及血栓形成)等。通常对动脉内膜纤维性硬化病变进行半定量评分,根据动脉管腔狭窄的比例,分为轻度(≤25%管腔狭窄)、中度(26%~50%管腔狭窄)及重度(>50%管腔狭窄)。
免疫荧光检查能够检测肾组织内沉积的各种免疫球蛋白及轻链的种类、补体成分、纤维蛋白原或其他特殊蛋白(淀粉样蛋白)等,也可检测构成免疫复合物的抗原成分,如乙型肝炎病毒抗原、PLA2R等,因而能够初步反映肾小球疾病的发病机制以及提供相关病因学证据。免疫荧光检查的结果判定应对全部标本进行详细观察,包括皮质及髓质区,记录肾小球的总数目、硬化及节段性硬化的肾小球数目、伴毛细血管袢坏死及含新月体的肾小球数目等,观察荧光阳性的成分、强度、分布方式及沉积部位等。通常根据荧光强度分为4级(-,±,+,2+,3+);荧光的分布方式描述为线样、细颗粒状、粗颗粒状、团块状、花瓣样、条带样或片块状等;荧光阳性的部位,包括系膜区、肾小球毛细血管壁、鲍曼囊壁、肾小管上皮及肾小管基底膜、肾间质和血管壁等,对于肾小球的分布范围可描述为弥漫性、局灶性、球性或节段性,需要具体描述荧光阳性的肾小球比例及其阳性部位,对于管型的阳性成分,重点比较两种轻链的荧光强度。值得注意的是,IgM、补体C3和C1q在肾小球节段性硬化病灶或瘢痕组织上均可呈节段阳性。且大多数肾间质、血管壁可见局灶性C3阳性,而肾小管管型则呈现IgA、κ和λ同时阳性。这些可作为荧光染色质量的内部阳性对照。
电镜检查具有高分辨性能特点,能够观察光镜难以分辨的早期和细微结构异常,同时也可对表现为电子致密物的免疫复合物进行精确定位,因而能够弥补光镜和免疫荧光检查的不足。电镜检查主要在肾小球疾病的诊断中具有重要价值。电镜观察时首先低倍下分辨肾小球及肾小管,对肾小球的结构进行详细观察,包括足细胞结构及足突融合程度、基底膜厚度与其结构、内皮细胞内管网状结构、内皮下内疏松层增宽、电子致密物的沉积部位(上皮下、基底膜内、内皮下及系膜区)、特殊亚结构(纤维丝、微管、结晶、胶原纤维、髓磷脂样小体、脂蛋白空泡等),并在高倍对基底膜厚度、纤维丝及微管的直径等进行测量。还要观察肾小管上皮细胞内特殊包涵体如结晶、病毒颗粒等、肾小管基底膜的电子致密物沉积、肾间质的浸润细胞类型、管周毛细血管基底膜的分层化(针对移植肾标本)等。